Spektroskopie zur Autofluoreszenz-Messung

Mikroskopische Analytik für Life-Cell-Messungen und fixiertes Material

Mit dem Durchbruch der molekülspezifischen Fluoreszenzmarker konnte eine der gravierendsten Umwälzungen in der mikroskopischen Analytik vollzogen werden. Seitdem gelingt es, mit Hilfe spezifischer Marker Transport- und Syntheseprozesse detailliert zu beschreiben. Die Erfassung von spektralen Verteilungen erfolgt in diesem Segment mit Hilfe von hochempfindlichen gekühlten CCD Spektrometern.

Als besonderen Vorteil ermöglichen gekühlte CCD Spektrometer die Messung von Autofluoreszenzen. Die Erfassung von Autofluoreszenzen hat den Reiz, dass das Primärsignal ohne immuno-histochemische Färbung entsteht und somit für Schnelltests verwendet werden kann. Die Methode ist darüber hinaus probenschonend und sowohl für Life Cell Messungen als auch bei fixiertem Material einsetzbar. Natürlich stehen die Reproduzierbarkeit und die Signifikanz auch hier ganz oben auf der Liste der zu diskutierenden Fragen. Unter diesem Aspekt konzentriert sich die Anwendung auf einen bestimmten Kreis an Substanzen. Zu nennen sind hier:


Adenin (exc.: 265 nm: em.:380 nm) DNA-Oligonukleotide (exc.: 330 nm: em.:380n m)
ATP (exc.: 272 nm: em.:390 nm) Tryptophan (exc.: 340 nm: em.:348 nm)
Phenylalanin (exc.: 282 nm: em.:284 nm) NADH (exc.: 340 nm: em.:470 nm)
Tryptamin (exc.: 285 nm: em.:360 nm) Riboflavin (exc.: 370 nm: em.:520 nm)
Tyrosin (exc.: 306 nm: em.:309 nm)  

Die Anregungsspektren liegen zwischen 265 nm und 370 nm und lassen sich am besten herausarbeiten, wenn breitbandige UV taugliche Lichtquellen wie beispielsweise eine Deuterium Halogenlampe oder ein XBO Brenner zur Verfügung stehen. Die Kombination mit einem DUV tauglichen Monochromator optimiert die Anregung genau spezifiziert auf den bestmöglichen Response einer Substanz.

Mikroskop Spektrometer System

Emmissionsseitig erfordert die Interpretation der Fluoreszenz zum Teil die nanometergenaue Abtrennung zwischen den Intensitätspeaks, was sich im Moment nur durch einen gekühltes Spektrometer mit bestmöglicher Auflösung umsetzen lässt.

SpectraVision Mikroskop-Spektrometer von A.S. & Co. lassen sich für diese Anforderungen individuell konfigurieren und erlauben die Erfassung von klassischen Breitbandsignalen bis hin zu extrem genauen Fluoreszenzspitzen. Im Bedarfsfall können darüber hinaus auch Zeitverläufe erfasst und als Spektrenplot gegen die Zeit aufgetragen werden.